Javascript saat ini dinonaktifkan di browser Anda.Ketika javascript dinonaktifkan, beberapa fungsi situs web ini tidak akan berfungsi.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spanyol * Para penulis ini memiliki beberapa wawasan tentang karya ini Equal latar belakang kontribusi: Asam hialuronat (HA) adalah polisakarida alami yang digunakan dalam produksi pengisi kulit untuk tujuan estetika.Karena memiliki waktu paruh beberapa hari di jaringan manusia, pengisi kulit berbasis HA dimodifikasi secara kimia untuk memperpanjang usianya di dalam tubuh.Modifikasi yang paling umum dalam pengisi berbasis HA komersial adalah penggunaan 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) sebagai agen pengikat silang untuk mengikat silang rantai HA.BDDE sisa atau tidak bereaksi dianggap tidak beracun pada <2 bagian per juta (ppm);oleh karena itu, sisa BDDE dalam pengisi dermal akhir harus diukur untuk memastikan keselamatan pasien.Bahan dan metode: Penelitian ini menjelaskan deteksi dan karakterisasi produk sampingan dari reaksi ikatan silang antara BDDE dan HA dalam kondisi basa dengan menggabungkan kromatografi cair dan spektrometri massa (LC-MS).Hasil: Setelah analisis yang berbeda, ditemukan bahwa kondisi basa dan suhu tinggi yang digunakan untuk mendisinfeksi hidrogel HA-BDDE mendorong pembentukan produk sampingan baru ini, senyawa "seperti propilen glikol".Analisis LC-MS mengkonfirmasi bahwa produk sampingan memiliki massa monoisotopik yang sama dengan BDDE, waktu retensi (tR) yang berbeda, dan mode absorbansi UV (λ=200 nm) yang berbeda.Tidak seperti BDDE, diamati dalam analisis LC-MS bahwa di bawah kondisi pengukuran yang sama, produk sampingan ini memiliki tingkat deteksi yang lebih tinggi pada 200 nm.Kesimpulan: Hasil ini menunjukkan bahwa tidak ada epoksida dalam struktur senyawa baru ini.Diskusi terbuka untuk menilai risiko produk sampingan baru yang ditemukan dalam produksi hidrogel HA-BDDE (HA dermal filler) untuk tujuan komersial.Kata kunci: asam hialuronat, HA dermal filler, asam hialuronat cross-linked, BDDE, analisis LC-MS, produk sampingan BDDE.
Pengisi berdasarkan asam hialuronat (HA) adalah pengisi kulit yang paling umum dan populer digunakan untuk tujuan kosmetik.1 Pengisi kulit ini adalah hidrogel, biasanya terdiri dari >95% air dan 0,5-3% HA, yang memberi mereka struktur seperti gel.2 HA adalah polisakarida dan komponen utama matriks ekstraseluler vertebrata.Salah satu bahannya.Ini terdiri dari (1,4)-asam glukuronat-β (1,3)-N-asetilglukosamin (GlcNAc) mengulangi unit disakarida yang dihubungkan oleh ikatan glikosidik.Pola disakarida ini sama pada semua organisme.Dibandingkan dengan beberapa pengisi berbasis protein (seperti kolagen), sifat ini membuat HA menjadi molekul yang sangat biokompatibel.Pengisi ini dapat menunjukkan spesifisitas urutan asam amino yang dapat dikenali oleh sistem kekebalan pasien.
Ketika digunakan sebagai pengisi dermal, keterbatasan utama HA adalah pergantiannya yang cepat di dalam jaringan karena adanya keluarga spesifik enzim yang disebut hyaluronidases.Sejauh ini, beberapa modifikasi kimia dalam struktur HA telah dijelaskan untuk meningkatkan waktu paruh HA dalam jaringan.3 Sebagian besar modifikasi ini mencoba untuk mengurangi akses hialuronidase ke polimer polisakarida dengan menghubungkan rantai HA secara silang.Oleh karena itu, karena pembentukan jembatan dan ikatan kovalen antarmolekul antara struktur HA dan zat pengikat silang, hidrogel HA ikatan silang menghasilkan lebih banyak produk degradasi anti-enzim daripada HA alami.4-6
Sejauh ini, bahan kimia pengikat silang yang digunakan untuk menghasilkan HA ikatan silang termasuk metakrilamida, 7 hidrazida, 8 karbodiimida, 9 divinil sulfon, 1,4-butanediol diglisidil eter (BDDE) dan poli(etilena glikol) diglisidil eter.10 ,11 BDDE saat ini merupakan agen pengikat silang yang paling umum digunakan.Meskipun jenis hidrogel ini telah terbukti aman selama beberapa dekade, agen pengikat silang yang digunakan adalah reagen reaktif yang mungkin sitotoksik dan, dalam beberapa kasus, mutagenik.12 Oleh karena itu, kandungan residunya dalam hidrogel akhir harus tinggi.BDDE dianggap aman bila konsentrasi residu kurang dari 2 bagian per juta (ppm).4
Ada beberapa metode untuk mendeteksi konsentrasi BDDE residu rendah, derajat ikatan silang dan posisi substitusi dalam hidrogel HA, seperti kromatografi gas, kromatografi eksklusi ukuran yang digabungkan dengan spektrometri massa (MS), metode pengukuran fluoresensi resonansi magnetik nuklir (NMR), dan Dioda array digabungkan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC).13-17 Studi ini menjelaskan deteksi dan karakterisasi produk sampingan dalam hidrogel HA ikatan silang akhir yang dihasilkan oleh reaksi BDDE dan HA dalam kondisi basa.HPLC dan spektrometri massa kromatografi cair (analisis LC-MS).Karena toksisitas produk sampingan BDDE ini tidak diketahui, kami merekomendasikan bahwa kuantifikasi residunya harus ditentukan dengan cara yang serupa dengan metode yang biasanya dilakukan pada BDDE dalam produk akhir.
Garam natrium yang diperoleh dari HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Jepang) memiliki berat molekul ~1.368.000 Da (metode Laurent) 18 dan viskositas intrinsik 2,20 m3/kg.Untuk reaksi pengikatan silang, BDDE (≥95%) dibeli dari Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Saline buffer fosfat dengan pH 7,4 dibeli dari Sigma-Aldrich Company.Semua pelarut, asetonitril dan air yang digunakan dalam analisis LC-MS dibeli dari kualitas kelas HPLC.Asam format (98%) dibeli sebagai reagen grade.
Semua percobaan dilakukan pada sistem UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) dan terhubung ke spektrometer massa triple quadrupole API 3000 yang dilengkapi dengan sumber ionisasi electrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
Sintesis hidrogel HA ikatan silang dimulai dengan menambahkan 198 mg BDDE ke dalam larutan natrium hialuronat (NaHA) 10% (b/b) dengan adanya 1% alkali (natrium hidroksida, NaOH).Konsentrasi BDDE akhir dalam campuran reaksi adalah 9,9 mg/mL (0,049 mM).Kemudian, campuran reaksi dicampur secara menyeluruh dan dihomogenkan dan dibiarkan berlangsung pada suhu 45°C selama 4 jam.19 pH reaksi dipertahankan pada ~12.
Setelah itu, campuran reaksi dicuci dengan air, dan hidrogel HA-BDDE akhir disaring dan diencerkan dengan buffer PBS untuk mencapai konsentrasi HA 10 sampai 25 mg/mL, dan pH akhir 7,4.Untuk mensterilkan hidrogel HA ikatan silang yang dihasilkan, semua hidrogel ini diautoklaf (120°C selama 20 menit).Hidrogel BDDE-HA yang telah dimurnikan disimpan pada suhu 4°C hingga analisis.
Untuk menganalisis BDDE yang ada dalam produk HA ikatan silang, sampel 240 mg ditimbang dan dimasukkan ke dalam lubang tengah (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; volume 0,5 mL) dan disentrifugasi pada 10.000 rpm pada suhu kamar 10 menit.Sebanyak 20 L cairan pull-down dikumpulkan dan dianalisis.
Untuk menganalisis standar BDDE (Sigma-Aldrich Co) dalam kondisi basa (1%, 0,1% dan 0,01% NaOH), jika kondisi berikut terpenuhi, sampel cair adalah 1:10, 1:100, atau hingga 1:1.000.000 Jika perlu, gunakan air deionisasi MilliQ untuk analisis.
Untuk bahan awal yang digunakan dalam reaksi ikatan silang (HA 2%, H2O, 1% NaOH, dan 0,049 mM BDDE), 1 mL setiap sampel yang dibuat dari bahan-bahan ini dianalisis menggunakan kondisi analisis yang sama.
Untuk menentukan spesifisitas puncak yang muncul di peta ion, 10 L larutan standar BDDE 100 ppb (Sigma-Aldrich Co) ditambahkan ke sampel 20 L.Dalam hal ini, konsentrasi akhir standar dalam setiap sampel adalah 37 ppb.
Pertama, siapkan larutan stok BDDE dengan konsentrasi 11.000 mg/L (11.000 ppm) dengan mengencerkan 10 L BDDE standar (Sigma-Aldrich Co) dengan 990 L MilliQ air (kepadatan 1,1 g/mL).Gunakan larutan ini untuk menyiapkan larutan BDDE 110 g/L (110 ppb) sebagai pengenceran standar antara.Kemudian, gunakan pengencer standar BDDE antara (110 ppb) untuk membuat kurva standar dengan mengencerkan pengencer antara beberapa kali untuk mencapai konsentrasi yang diinginkan yaitu 75, 50, 25, 10, dan 1 ppb.Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1, ditemukan bahwa kurva standar BDDE dari 1,1 hingga 110 ppb memiliki linieritas yang baik (R2>0,99).Kurva standar diulang dalam empat percobaan independen.
Gambar 1 Kurva kalibrasi standar BDDE diperoleh dengan analisis LC-MS, di mana korelasi yang baik diamati (R2>0,99).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa.
Untuk mengidentifikasi dan mengukur standar BDDE yang ada dalam HA yang terkait silang dan standar BDDE dalam larutan dasar, analisis LC-MS digunakan.
Pemisahan kromatografi dicapai pada kolom LUNA 2,5 m C18(2)-HST (50x2.0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) dan disimpan pada suhu kamar (25 °C) selama analisis.Fase gerak terdiri dari asetonitril (pelarut A) dan air (pelarut B) yang mengandung 0,1% asam format.Fase gerak dielusi dengan elusi gradien.Gradiennya adalah sebagai berikut: 0 menit, 2% A;1 menit, 2% A;6 menit, 98% A;7 menit, 98% A;7,1 menit, 2% A;10 menit , 2% A. Waktu berjalan adalah 10 menit dan volume injeksi adalah 20 L.Waktu retensi BDDE adalah sekitar 3,48 menit (berkisar dari 3,43 hingga 4,14 menit berdasarkan percobaan).Fase gerak dipompa pada laju aliran 0,25 mL/menit untuk analisis LC-MS.
Untuk analisis dan kuantifikasi BDDE oleh MS, sistem UPLC (Waters) digabungkan dengan spektrometer massa triple quadrupole API 3000 (AB SCIEX) yang dilengkapi dengan sumber ionisasi elektrospray, dan analisis dilakukan dalam mode ion positif (ESI+).
Menurut analisis fragmen ion yang dilakukan pada BDDE, fragmen dengan intensitas tertinggi ditentukan sebagai fragmen yang sesuai dengan 129,1 Da (Gambar 6).Oleh karena itu, dalam mode pemantauan multi-ion (MIM) untuk kuantifikasi, konversi massa (rasio massa-ke-muatan [m/z]) dari BDDE adalah 203,3/129,1 Da.Ini juga menggunakan mode pemindaian penuh (FS) dan mode pemindaian ion produk (PIS) untuk analisis LC-MS.
Untuk memverifikasi kekhususan metode, sampel kosong (fase gerak awal) dianalisis.Tidak ada sinyal yang terdeteksi dalam sampel kosong dengan konversi massa 203,3/129,1 Da.Mengenai pengulangan percobaan, 10 injeksi standar 55 ppb (di tengah kurva kalibrasi) dianalisis, menghasilkan deviasi standar residual (RSD) <5% (data tidak ditampilkan).
Kandungan BDDE residu dikuantifikasi dalam delapan hidrogel HA ikatan silang BDDE yang diautoklaf berbeda, sesuai dengan empat percobaan independen.Seperti dijelaskan di bagian "Bahan dan Metode", kuantifikasi dievaluasi oleh nilai rata-rata kurva regresi pengenceran standar BDDE, yang sesuai dengan puncak unik yang terdeteksi pada transisi massa BDDE 203,3/129,1 Da, dengan retensi waktu 3,43 hingga 4,14 menit Tidak menunggu.Gambar 2 menunjukkan contoh kromatogram standar referensi BDDE 10 ppb.Tabel 1 merangkum kandungan BDDE sisa dari delapan hidrogel yang berbeda.Kisaran nilainya adalah 1 hingga 2,46 ppb.Oleh karena itu, konsentrasi residu BDDE dalam sampel dapat diterima untuk penggunaan manusia (<2 ppm).
Gambar 2 Kromatogram ion standar referensi BDDE 10 ppb (Sigma-Aldrich Co), transisi MS (m/z) diperoleh dengan analisis LC-MS sebesar 203,30/129,10 Da (dalam mode MRM positif).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan reaksi ganda;MS, massa;m/z, rasio massa terhadap muatan.
Catatan: Sampel 1-8 adalah hidrogel HA ikatan silang BDDE yang diautoklaf.Jumlah residu BDDE dalam hidrogel dan puncak waktu retensi BDDE juga dilaporkan.Akhirnya, keberadaan puncak baru dengan waktu retensi yang berbeda juga dilaporkan.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asam hialuronat;MRM, pemantauan reaksi ganda;tR, waktu retensi;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;RRT, waktu retensi relatif.
Anehnya, analisis kromatogram ion LC-MS menunjukkan bahwa berdasarkan semua sampel hidrogel HA ikatan silang yang diautoklaf dianalisis, ada puncak ekstra pada waktu retensi yang lebih pendek yaitu 2,73 hingga 3,29 menit.Sebagai contoh, Gambar 3 menunjukkan kromatogram ion dari sampel HA yang terhubung silang, di mana puncak tambahan muncul pada waktu retensi yang berbeda sekitar 2,71 menit.Waktu retensi relatif yang diamati (RRT) antara puncak yang baru diamati dan puncak dari BDDE ditemukan 0,79 (Tabel 1).Karena kita tahu bahwa puncak yang baru diamati kurang dipertahankan dalam kolom C18 yang digunakan dalam analisis LC-MS, puncak baru mungkin sesuai dengan senyawa yang lebih polar daripada BDDE.
Gambar 3 Kromatogram ion sampel hidrogel HA ikatan silang yang diperoleh dengan LC-MS (konversi massa MRM 203.3/129.0 Da).
Singkatan: HA, asam hialuronat;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan reaksi ganda;RRT, waktu retensi relatif;tR, waktu retensi.
Untuk mengesampingkan kemungkinan bahwa puncak baru yang diamati mungkin merupakan kontaminan yang awalnya ada dalam bahan baku yang digunakan, bahan baku ini juga dianalisis menggunakan metode analisis LC-MS yang sama.Bahan awal yang dianalisis meliputi air, 2% NaHA dalam air, 1% NaOH dalam air, dan BDDE pada konsentrasi yang sama yang digunakan dalam reaksi ikatan silang.Kromatogram ion dari bahan awal yang digunakan tidak menunjukkan adanya senyawa atau puncak, dan waktu retensinya sesuai dengan puncak baru yang diamati.Fakta ini menghilangkan gagasan bahwa tidak hanya bahan awal yang mungkin mengandung senyawa atau zat yang dapat mengganggu prosedur analisis, tetapi tidak ada tanda kemungkinan kontaminasi silang dengan produk laboratorium lainnya.Nilai konsentrasi yang diperoleh setelah analisis LC-MS BDDE dan puncak baru ditunjukkan pada Tabel 2 (sampel 1-4) dan kromatogram ion pada Gambar 4.
Catatan: Sampel 1-4 sesuai dengan bahan baku yang digunakan untuk memproduksi hidrogel HA ikatan silang BDDE yang diautoklaf.Sampel ini tidak diautoklaf.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asam hialuronat;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan beberapa reaksi.
Gambar 4 sesuai dengan kromatogram LC-MS dari sampel bahan baku yang digunakan dalam reaksi ikatan silang HA dan BDDE.
Catatan: Semua ini diukur pada konsentrasi dan rasio yang sama yang digunakan untuk melakukan reaksi ikatan silang.Angka-angka untuk bahan mentah yang dianalisis dengan kromatogram sesuai dengan: (1) air, (2) larutan berair HA 2%, (3) larutan NaOH 1%.Analisis LC-MS dilakukan untuk konversi massa 203,30/129,10 Da (dalam mode MRM positif).
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA, asam hialuronat;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan beberapa reaksi.
Kondisi yang menyebabkan pembentukan puncak baru dipelajari.Untuk mempelajari bagaimana kondisi reaksi yang digunakan untuk menghasilkan hidrogel HA ikatan silang mempengaruhi reaktivitas zat pengikat silang BDDE, yang mengarah pada pembentukan puncak baru (kemungkinan produk sampingan), pengukuran yang berbeda dilakukan.Dalam penentuan ini, kami mempelajari dan menganalisis pengikat silang BDDE akhir, yang diperlakukan dengan konsentrasi NaOH yang berbeda (0%, 1%, 0,1%, dan 0,01%) dalam media berair, diikuti dengan atau tanpa autoklaf.Prosedur bakteri untuk mensimulasikan kondisi yang sama sama dengan metode yang digunakan untuk menghasilkan hidrogel HA ikatan silang.Seperti yang dijelaskan di bagian "Bahan dan Metode", transisi massa sampel dianalisis dengan LC-MS menjadi 203,30/129,10 Da.BDDE dan konsentrasi puncak baru dihitung, dan hasilnya ditunjukkan pada Tabel 3. Tidak ada puncak baru yang terdeteksi pada sampel yang tidak diautoklaf, terlepas dari keberadaan NaOH dalam larutan (sampel 1-4, Tabel 3).Untuk sampel yang diautoklaf, puncak baru hanya terdeteksi dengan adanya NaOH dalam larutan, dan pembentukan puncak tampaknya bergantung pada konsentrasi NaOH dalam larutan (sampel 5-8, Tabel 3) (RRT = 0,79).Gambar 5 menunjukkan contoh kromatogram ion, menunjukkan dua sampel yang diautoklaf dengan ada atau tidaknya NAOH.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan beberapa reaksi.
Catatan: Kromatogram atas: Sampel diolah dengan larutan berair NaOH 0,1% dan diautoklaf (120°C selama 20 menit).Kromatogram bawah: Sampel tidak diperlakukan dengan NaOH, tetapi diautoklaf dalam kondisi yang sama.Konversi massa 203,30/129,10 Da (dalam mode MRM positif) dianalisis dengan LC-MS.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan beberapa reaksi.
Dalam semua sampel yang diautoklaf, dengan atau tanpa NaOH, konsentrasi BDDE sangat berkurang (hingga 16,6 kali) (sampel 5-8, Tabel 2).Penurunan konsentrasi BDDE mungkin disebabkan oleh fakta bahwa pada suhu tinggi, air dapat bertindak sebagai basa (nukleofil) untuk membuka cincin epoksida BDDE untuk membentuk senyawa 1,2-diol.Kualitas monoisotop senyawa ini berbeda dengan BDDE dan karenanya tidak akan terpengaruh.LC-MS mendeteksi pergeseran massa 203,30/129,10 Da.
Akhirnya, percobaan ini menunjukkan bahwa pembentukan puncak baru tergantung pada keberadaan BDDE, NAOH, dan proses autoklaf, tetapi tidak ada hubungannya dengan HA.
Puncak baru yang ditemukan pada waktu retensi kurang lebih 2,71 menit kemudian dikarakterisasi dengan LC-MS.Untuk tujuan ini, BDDE (9,9 mg/mL) diinkubasi dalam larutan berair NaOH 1% dan diautoklaf.Pada Tabel 4, karakteristik puncak baru dibandingkan dengan puncak referensi BDDE yang diketahui (waktu retensi sekitar 3,47 menit).Berdasarkan analisis fragmentasi ion kedua puncak, dapat disimpulkan bahwa puncak dengan waktu retensi 2,72 menit menunjukkan fragmen yang sama dengan puncak BDDE, tetapi dengan intensitas yang berbeda (Gambar 6).Untuk puncak yang sesuai dengan waktu retensi (PIS) 2,72 menit, puncak yang lebih intens diamati setelah fragmentasi pada massa 147 Da.Pada konsentrasi BDDE (9,9 mg/mL) yang digunakan dalam penentuan ini, mode absorbansi yang berbeda (UV, =200 nm) dalam spektrum ultraviolet juga diamati setelah pemisahan kromatografi (Gambar 7).Puncak dengan waktu retensi 2,71 menit masih terlihat pada 200 nm, sedangkan puncak BDDE tidak dapat diamati pada kromatogram pada kondisi yang sama.
Tabel 4 Hasil karakterisasi puncak baru dengan waktu retensi sekitar 2,71 menit dan puncak BDDE dengan waktu retensi 3,47 menit
Catatan: Untuk mendapatkan hasil ini, analisis LC-MS dan HPLC (MRM dan PIS) dilakukan pada dua puncak.Untuk analisis HPLC, digunakan deteksi UV dengan panjang gelombang 200 nm.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC, kromatografi cair kinerja tinggi;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan reaksi ganda;m/z, rasio massa terhadap muatan;PIS, pemindaian Ion produk;sinar ultra violet, sinar ultra violet.
Catatan: Fragmen massa diperoleh dengan analisis LC-MS (PIS).Kromatogram atas: spektrum massa fragmen sampel standar BDDE.Kromatogram bawah: Spektrum massa dari puncak baru yang terdeteksi (RRT terkait dengan puncak BDDE adalah 0,79).BDDE diproses dalam larutan NaOH 1% dan diautoklaf.
Singkatan: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS, kromatografi cair dan spektrometri massa;MRM, pemantauan reaksi ganda;PIS, pemindaian ion produk;RRT, waktu retensi relatif.
Gambar 7 Kromatogram ion ion prekursor 203,30 Da, dan (A) puncak baru dengan waktu retensi 2,71 menit dan (B) deteksi UV puncak standar referensi BDDE pada 3,46 menit pada 200 nm.
Dalam semua hidrogel HA ikatan silang yang dihasilkan, diamati bahwa konsentrasi residu BDDE setelah kuantifikasi LC-MS adalah <2 ppm, tetapi puncak baru yang tidak diketahui muncul dalam analisis.Puncak baru ini tidak sesuai dengan produk standar BDDE.Produk standar BDDE juga telah mengalami analisis konversi kualitas yang sama (konversi MRM 203,30/129,10 Da) dalam mode MRM positif.Umumnya, metode analisis lain seperti kromatografi digunakan sebagai uji batas untuk mendeteksi BDDE dalam hidrogel, tetapi batas deteksi maksimum (LOD) sedikit lebih rendah dari 2 ppm.Di sisi lain, sejauh ini, NMR dan MS telah digunakan untuk mengkarakterisasi derajat ikatan silang dan/atau modifikasi HA dalam fragmen unit gula produk HA ikatan silang.Tujuan dari teknik ini tidak pernah untuk mengukur deteksi residu BDDE pada konsentrasi rendah seperti yang kami jelaskan dalam artikel ini (LOD metode LC-MS kami = 10 ppb).
Waktu posting: Sep-01-2021